Mikrobiološka dijagnostika počiva na jednom fundamentalnom principu koji se često potcenjuje u svakodnevnoj kliničkoj praksi: rezultat je onoliko pouzdan koliko je uzorak bio dobar. Čak ni najsavremenija laboratorijska oprema ne može kompenzovati loše uzorkovan, kontaminiran ili nepropisno transportovan uzorak. Upravo zbog toga VetPro ovim tekstom želi da podeli konkretne, praktične smernice koje će Vam pomoći da svaki uzorak koji stigne do naših analitičara zaista nosi dijagnostički potencijal.

Ovo nije formalna lista uputstava. Ovo je praktični vodič napisan od strane kolega, za kolege.

Opšta pravila uzorkovanja: šta uvek važi

Pre nego što se posvetimo pojedinim vrstama uzoraka, postoje tri principa koja moraju biti ispunjena bez obzira na to koji materijal uzorkujete:

1. Uzorkujte što ranije u toku bolesti

Rani stadijum infektivnog procesa podrazumeva veću bakterijsku ili gljivičnu opterećenost uzorka, što znači veću šansu za uspešnu izolaciju i identifikaciju uzročnika. Što duže čekate, razlike između patogena i komensalne flore postaju sve teže za interpetaciju.

2. Uzorkujte pre antibiotske terapije ili napravite pauzu

Ovo je verovatno najčešći uzrok lažno negativnih nalaza u mikrobiologiji. Čak i kratka primena antibiotika od samo 24 do 48 sati može supprimovati rast uzročnika do te mere da kultura ostane sterilna, iako je infekcija klinički očigledna. Ako je pacijent već na terapiji, uzmite uzorak tek nakon pauze od 7 do 10 dana. Ukoliko klinička situacija ne dozvoljava prekid terapije, jasno navedite to u zahtevu jer nam pomaće u interpretaciji nalaza.

3. Smanjite kontaminaciju na minimum

Svaki uzorak koji sadrži floru iz okolne sredine ili sa kože nosi rizik od lažno pozitivnih nalaza ili maskiranja pravog uzročnika. Aseptična tehnika nije samo pravilo — ona je preduslov smislene dijagnostike.

Aerobna kultura: brisevi i površinski materijali

Za aerobnu bakterijsku kulturu uzorci se uzimaju sterilnim brisevima. Tehnika uzorkovanja varira u zavisnosti od prirode promene:

• Kod suvih kožnih lezija (ulkusi, krastice, eksforacije) neophodno je prethodno navlažiti promenjen predeo sterilnim fiziološkim rastvorom. Suva površina nosi manji prinos bakterija i često ne reflektuje mikrobiom aktivne lezije.
• Nakon uzorkovanja, bris se čuva na temperaturi frižidera (2–8°C). Uzorak je stabilan do 48 sati.
• Ako postoji kašnjenje od više od 2 sata pre slanja, navlažite vrh štapića sa dve-tri kapi sterilnog fiziološkog rastvora. Ovo sprečava isušivanje i gubitak vijabilnosti bakterija koje zavise od vlažne sredine.

Jedan praktični detalj koji se često preskače: nemojte uzorkovati bris samo sa površine vidljive lezije. Ako postoji sekrecija iz dubine, ili ivice lezije pokazuju aktivnu inflamaciju, upravo te zone nose najveći dijagnosticki prinos.

Anaerobna kultura: tkiva i telesne tečnosti

Anaerobni uzročnici zahtevaju poseban pristup, i to iz jednog temeljnog razloga — kiseonik je za njih letalan. Svaki kontakt uzorka sa vazduhom smanjuje šansu za uspešnu izolaciju.

Nekoliko ključnih tačaka:

• Uzorci su uglavnom tkiva i telesne tečnosti, ne brisevi. Brisevi su prihvatljivi jedino ako se odmah potope u odgovarajuci anaerobni transportni medijum.
• Temperatura frižidera je kontraindikovana za anaerobne uzorke. Za razliku od aerobnih uzoraka, anaerobni uzročnici propadaju na niskim temperaturama. Uzorak se čuva i transportuje na sobnoj temperaturi.
• Smanjite kontakt sa vazduhom na minimum: koristite hermetički zatvorene posude, anaerobne transportne posude, ili pošaljite uzorak u špricu sa zatopljenim vrhom.

Hemokultura: stroga asepsa kao conditio sine qua non

Hemokultura je dijagnostički alat koji zahteva najviši stepen pažnje pri uzorkovanju. Kontaminacija uzorka kožnom florom jedan je od najčešćih uzroka lažno pozitivnih nalaza i neretko vodi ka nepotrebnoj ili pogrešnoj antibiotskoj terapiji.

Ključne smernice:

• Uzorkovanje strogo pre antibiotske terapije. Ovo je apsolutni prioritet. Posle početka terapije, šansa za pozitivnu hemokulturu dramatično pada.
• Temeljno očistite i dezinfikujte kožu na mestu venepunkcije pre uzorkovanja.
• Krv prebacite direktno u bočicu sa posebnim medijumom za hemokulturu uz obaveznu promenu igle.
• Gumeni čep bočice dezinfikujte alkoholom pre upotrebe.
• Zgrušana krv je neprihvatljiv uzorak jer se ne može obraditi.
• Nikada ne dodajte antikoagulanse u krv za hemokulturu. Mnogi antikoagulansi imaju antibakterijsko dejstvo (naročito EDTA) i mogu inhibirati rast uzročnika.

Uzorci iz respiratornog trakta: sputum i lavaže

Dijagnostika respiratornih infekcija mikrobiološkim metodama zahteva razumevanje jednog anatomskog ograničenja: životinje ne mogu da iskašlju sputum na komandu.

• Trahealna i bronhealna lavaža (BAL — bronhoalveolarna lavaža) jedini su prihvatljivi zamena za sputum. Vrše se u opštoj anesteziji, a iz dobijenog ispirka moguća je izolacija aerobnih bakterija uključujući i Mikoplazme (PCR).
• Bris grla i pljuvačka su neprihvatljivi uzorci pri sumnji na pneumoniju. Reflektuju floru gornjeg respiratornog trakta i komensalne mikroorganizme orofarinksa, a ne uzročnike u parenhimu pluća.
• Za detalje oko procedure uzorkovanja, kontaktirajte nas pre slanja — rado ćemo Vas provesti kroz protokol.

Pleuralne i peritonealne tečnosti, apscesi i likvor

Uzorci iz sterilnih telesnih šupljina uzorkuju se aseptično, iglom i špricem. Ovakav materijal je prihvatljiv i za aerobnu i za anaerobnu bakteriološku kulturu, kao i za mikološke analize.

Praktična napomena za transport: uzorak možete poslati direktno u špricu kojom je vršeno punktiranje, ali bez igle i uz zatopljeni vrh šprica na plamenu. Ovo osigurava hermetičnost i sprečava kontaminaciju i gubitak anaerobnih uzročnika.

Posebno napominjemo: materijal iz apscesa je često izuzetno bogat anaerobnim uzročnicima. Upravo ovi uzorci zahtevaju najbrži transport i najstrožu pažnju pri očuvanju anaerobnih uslova.

Uzorci kože i dlake

Za izolaciju patogenih bakterija sa kože, validan uzorak je bris sa površine promenjenog predela. Obavezno uzorkujte i malo dlake sa te zone. Dermatofiti i neki bakterijski patogeni kolonizuju folikule i koren dlake, pa bris bez dlake može biti lažno negativan.

Kod kroničnih kožnih lezija, važno je uzorkovati ivicu aktivne lezije, a ne centar kraste ili necroza. U centru stare lezije prinos vijabilnih uzročnika je obično nizak.

Feces

Feces je validan uzorak za izolaciju enteropatogenih bakterija, naročito kada se klinički sumnja na Salmonella ili Clostridium vrste. U našoj laboratoriji se svaki uzorak koprokulture se ispituje rutinski na prisustyvo Salmonella spp.

Važno: rektalni bris je neprihvatljiv uzorak za ovu indikaciju. Bris uzorkuje sluznicu i malu količinu fecesa, što nije dovoljna količina materijala za pouzdanu kulturu.

Koristite svež feces, prikupljen neposredno pre slanja. Što je uzorak svežiji, to je bolje jer enterobakterije, a posebno Clostridium, gube vijabilnost relativno brzo van domaćina.

Sinovijalna tečnost: brzi transport je kritičan

Uzorkovanje sinovijalne tečnosti vrši se u aseptičnim, operativnim uslovima. Odmah po uzorkovanju, prioritet je transport do laboratorije.

Poseban razlog za hitnost: ako se klinički sumnja na Mikoplazme (karakteristične po artritisu bez prisustva tipičnih bakterioloških parametara), uzorak mora stići do laboratorije u najkraćem roku od uzorkovanja. Mikoplazme su izuzetno osetljive na promene temperature i brzo propadaju — ne ostavljajte ovaj uzorak u frižideru.

Urin

Mikrobiološko ispitivanje urina posebno je osetljivo na prethodno sprovedenu terapiju. Ako je pacijent bio na antibioticima, nalaz urina će gotovo sigurno biti negativan — čak i kada postoji aktivna infekcija.

Pravilo: uzorkujte urin pre početka terapije, ili obezbedite pauzu od terapije od 7 do 10 dana kako bi nalaz bio dijagnostički verodostojan.

Preporučena metoda uzorkovanja je cistoceteza, koja minimizuje kontaminaciju florom donjeg dela urinarnog trakta i kože.

Bioptati tkiva

Tkivni bioptati namenjeni mikrobiološkom pregledu ne smeju se stavljati u formalin. Formalin fiksira tkivo i ubija sve mikroorganizme a uzorak postaje neupotrebljiv za kulturu i PCR.

Svež tkivni materijal dostavite u sterilnoj posudi, po mogućnosti bez dodataka. Ako transport traje duže od sat-dva, kontaktirajte nas radi preporuke za odgovarajući transportni medijum.

Anaerobni uzročnici: kada ih imati na umu?

Anaerobne infekcije su u veterinarskoj praksi često potcenjene, delimično zbog toga što su zahtevne za dijagnostiku. Ipak, anaerobni uzročnici su česti ili dominantni kod sledećih kliničkih slika:

• Apscesi svih lokalizacija
• Zapaljenje paranalnih žlezda (posebno kod zatvaranja i sekundarnih infekcija)
• Bakterijski peritonitis
• Septikemija
• Zapaljenja digestivnog trakta (naročito nekrotizirajući enterokolitis)
• Endometritis
• Posttraumatsko zapaljenje mekog tkiva (ujedi, rane od saobraćajnih udesa)
• Osteomijelitis
• Postoperativne komplikacije
• Piotoraks
• Hronične rane koje ne reaguju na standardnu antibiotsku terapiju
• Paradentoza

Svaki put kada Vam pacijent ne reaguje očekivano na empirijsku antibiotsku terapiju usmerenu na aerobne uzročnike — razmislite o anaerobima. I, što je jednako važno, uzmite odgovarajući uzorak pre nego što (ponovo) promenite terapiju.

VetPro laboratorija: Partner u mikrobiološkoj dijagnostici

Pravilno uzorkovanje je zajednički projekat. I Vi i mi imamo ulogu u konačnom ishodu. Naš tim je uvek dostupan za konsultaciju pre uzorkovanja, naročito kod specifičnih ili atipičnih slučajeva.

Ako niste sigurni koji uzorak uzeti, kojim redosledom, u kakvu posudu ili na kojoj temperaturi transportovati — javite nam se. Bolje je izgubiti pet minuta na konsultaciji nego ponoviti uzorkovanje.

VetPro specijalistička veterinarska laboratorija Svaki uzorak pregledaju specijalisti veterinarske mikrobiologije.

Posetite nas na vetpro.rs ili nas kontaktirajte direktno za konsultaciju.